真菌的培養(yǎng)方法

1、鋼環(huán)法

（1）材料：白假絲酵母菌、沙保弱培養(yǎng)基、無菌玻片、蓋玻片、鋼環(huán)（帶有缺 口）、石蠟。

（2）方法

①用無菌鑷子取無菌小培養(yǎng)鋼環(huán)，環(huán)的兩面分別蘸取熔化的固體石蠟，平置于無菌載玻片上，另取一無菌蓋玻片，在酒精燈火焰上加熱后覆蓋于鋼環(huán)上，待冷后，小培養(yǎng)鋼圈即被固定于載玻片與蓋玻片之間。

②用毛細滴管吸取融化的培養(yǎng)基，從鋼環(huán)上端孔注入，注入量占容積的1/2即可。

③培養(yǎng)基冷卻凝固后，用接種針挑取材料，由上端孔接種于環(huán)內(nèi)培養(yǎng)基上。

④置濕盒內(nèi)，室溫或37℃下培養(yǎng)2—3d后，逐日觀察，鏡下可連續(xù)看到真菌生長過程及菌絲、孢子等特征，一般7d左右即可長好。

⑤也可不用小培養(yǎng)鋼環(huán)，直接將融化的培養(yǎng)基滴于無菌玻片上，待冷凝后從周邊接種材料，用蓋玻片覆蓋后培養(yǎng)，在顯微鏡下連續(xù)觀察生長情況。

（3）結(jié)果：鏡下觀察可見到有胞壁增厚的厚膜孢子及假菌絲。

2、小塊瓊脂玻片培養(yǎng)法
用無菌操作法將制好的待用瓊脂平板用無菌接種針或接種環(huán)切成大約1cm2的方塊，將其放置于滅菌的載玻片上。將標(biāo)本或待檢菌接種于瓊脂塊四周邊緣靠上方部位，然后用無菌鑷子取一無菌的蓋玻片蓋在瓊脂上。在無菌平皿內(nèi)放入少量無菌水和一個無菌U形（或V形）玻璃棒。將此載玻片置于玻璃棒上，蓋上平皿蓋培養(yǎng)。每日用肉眼和顯微鏡觀察孢子和菌絲的特點。