正常情況下，機體的血液是無菌的，如果檢出細菌（排除污染）即有確診意義。葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌、大腸埃希菌、沙門菌、變形桿菌、銅綠假單胞菌和厭氧菌等均可引起菌血癥、敗血癥和膿毒血癥。對臨床表現(xiàn)酷似敗血癥而普通培養(yǎng)呈陰性者，應(yīng)注意厭氧菌或L型菌感染的可能性。
【材料】
1、可疑敗血癥患者血標本。
2、肉湯、血瓊脂平板。
3、人血漿或兔血漿。
4、0.9%氯化鈉溶液、載玻片等。
【操作】
一、血標本的采取
1、盡可能于疾病早期、高熱期（陽性率zui高）、抗菌藥物治療前采血，并注意以無菌操作技術(shù)采集標本，并盡快送檢。
2、如已用過抗菌藥物，應(yīng)在化驗單上注明使用過何種抗菌藥物，以便有關(guān)檢驗人員在進行細菌培養(yǎng)時作適當處理。例如用過青霉素的，則應(yīng)在培養(yǎng)液內(nèi)加入青霉素酶；用過鏈霉素的，則應(yīng)加入胱氨酸；用過磺胺的，則應(yīng)加入對氨基苯甲酸；用過四環(huán)素族、多黏菌素、鏈霉素等的，可加入0.3%硫酸鎂，以消除藥物對細菌的抑制作用，提高陽性率。
3、無菌操作采取靜脈血3—5ml，立即注入含30—50ml肉湯培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中搖勻，以防血液凝固。因為血液中含抗體和補體等抗菌物質(zhì)，所以血液和肉湯培養(yǎng)液的比例一般以1：10為宜。如果血液過多，抗菌物質(zhì)未被充分稀釋，會影響細菌的生長繁殖；血液過少則細菌數(shù)量也少，兩者均會影響細菌檢出的陽性率。
4、凡疑為厭氧菌引起的敗血癥時，應(yīng)按厭氧培養(yǎng)程序?qū)毦M行分離培養(yǎng)鑒定。血液中因含菌數(shù)較少，一般不作直接涂片鏡檢，首先接種在液體培養(yǎng)液中進行增菌，然后再進行分離鑒定。
二、鑒定程序
三、操作
1、增菌及分純
（1）將已接種血標本的肉湯培養(yǎng)液置37℃培養(yǎng)，逐日觀察，連續(xù)9天。無菌生長者則肉湯呈清亮，血液呈鮮紅色沉于瓶底（如增菌培養(yǎng)結(jié)果為液體培養(yǎng)液外觀清亮，應(yīng)在培養(yǎng)7天后，作盲目轉(zhuǎn)種血平板，血平板經(jīng)培養(yǎng)后仍無菌生長者，方可報告為無菌生長）；有細菌生長，則可出現(xiàn)肉湯混濁、顆粒狀沉淀、菌膜、凝胨、色素產(chǎn)生、血液變?yōu)榘导t玫瑰色等現(xiàn)象。
（2）如增菌培養(yǎng)液中有菌生長，則用無菌接種環(huán)挑取肉湯培養(yǎng)液之底部沉淀，劃線接種于血平板上，置37℃培養(yǎng)18—24h小時。
2、形態(tài)學(xué)初步鑒定：觀察血平板上菌落特征，取菌落涂片作革蘭染色鏡檢，根據(jù)菌落特點，結(jié)合染色結(jié)果得出初步鑒定結(jié)論。
3、生化鑒定
（1）觸酶實驗（過氧化氫酶實驗）：用接種環(huán)挑取固體培養(yǎng)液上的菌落，置于潔凈的試管內(nèi)或玻片上，然后滴加3%過氧化氫溶液數(shù)滴，觀察結(jié)果。
結(jié)果判定：于半分鐘內(nèi)有大量氣泡產(chǎn)生者為陽性，不產(chǎn)生氣泡者為陰性。
絕大多數(shù)細菌均產(chǎn)生過氧化氫酶，但鏈球菌屬的細菌其觸酶實驗 陰性。故常用此實驗來鑒別葡萄球菌和鏈球菌。此實驗不宜用血平板上的菌落，因紅細胞內(nèi)含有血紅素，而血紅素具有過氧化氫酶活性，故紅細胞可導(dǎo)致觸酶實驗假陽性。此外，在陳舊培養(yǎng)物上細菌可失去觸酶活性。
（2）葡萄球菌凝固酶實驗：葡萄球菌凝固酶一般是由致病性葡萄球菌產(chǎn)生的一種能使枸櫞酸鈉或肝素抗凝的人或兔血漿發(fā)生凝固的酶類物質(zhì)。血漿凝固酶實驗被廣泛用于常規(guī)鑒別金葡萄球菌與其他葡萄球菌，是致病性葡萄球菌的一個主要鑒定依據(jù)。
（3）耐熱脫氧核糖核酸酶實驗：致病性葡萄球菌產(chǎn)生一種耐熱的DNA酶，能分解DNA。非致病葡萄球菌雖也能產(chǎn)生DNA酶，但不耐熱。因此，耐熱DNA酶測定可作為鑒定致病性葡萄球菌的一個重要指標。
（4）甘露醇發(fā)酵實驗：將金葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌分別接種于甘露醇發(fā)酵管，其上覆蓋無菌液體石蠟油，37℃孵育18—24h小時觀察結(jié)果。致病性的葡萄球菌多能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，而非致病性的葡萄球菌如表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌均不能發(fā)酵甘露醇。
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